一般情况下，植物根系分泌的有机酸主要包括：甲酸、乙酸、乳酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、草酸、麦根酸、番石榴酸等。其中草酸是最简单的二元有机羧酸，是森林土壤中主要的低分子有机酸。除上述有机酸外，根系分泌物中还包括一种具有芳香气味的安息香酸、水杨酸、对羟基苯甲酸、香草酸、香豆酸、阿魏酸、丁香酸等酚类化合物，这些物质被公认为化感物质。
HPLC对低分子有机酸测定分离效果好,灵敏度高,分析速度快,测定准确,并且能连续进样,操作方便,因此在有机酸测定方面运用广泛。HPLC测定的有机酸包括:乙酸、草酸、丙二酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、酒石酸、马来酸、乙醇酸、富马酸等。HPLC的测定条件基本一致,色谱柱C18反相柱,4.6mmxmm,5m,流动相是20～25mmol/L的KH2PO4溶液,用H3PO4调节pH值到2.5左右,流速0.5～1Ml/min,检测波长～nm,柱温30℃,进样量为10mL。为保持柱效,样品的测定时间应比标准品的测定时间长,使色谱柱里的各种物质充分洗脱,使下一样品的测定不受影响。施积炎等用HPLC分析测定了根分泌物中的草酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸等。
HPLC分离过程中,硝酸、硫酸等无机酸易干扰有机酸的分离,俞乐等在流动相中添加了配对的离子四丁基硫酸铵(TBA),并延长草酸停留时间,消除了无机酸的干扰。为保证测定质量,田中民等在测定缺磷情况下根分泌的有机酸时,每测10个样品加测1次标准品,对难以确定有机酸的吸收峰,改变流动相的pH值和流速。
